熒光素酶（Luciferase）是自然界中能夠產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱，常用包括：螢火蟲熒光素酶、海腎熒光素酶等。熒光素酶的基因可以被合成并轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，將不同類型的細(xì)胞（骨髓干細(xì)胞、T細(xì)胞等）標(biāo)記上（即表達(dá)）熒光素酶，就可以用高敏感度的CCD相機(jī)進(jìn)行對(duì)細(xì)胞體內(nèi)進(jìn)行觀察而不會(huì)傷害到細(xì)胞。
主要應(yīng)用
潛在啟動(dòng)子/啟動(dòng)子核心區(qū)域檢測(cè)
潛在miRNA對(duì)3-UTR等調(diào)控核心元件檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)流程
雙熒光素酶報(bào)告驗(yàn)證流程圖
1、重組質(zhì)粒制備: 制備含有待檢測(cè)基因-Luc/Rluc的重組質(zhì)粒；
2、細(xì)胞系選擇: 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇細(xì)胞株，通常選擇轉(zhuǎn)染效率較高的293T細(xì)胞或原代細(xì)胞等；
3、共轉(zhuǎn)染: 將帶有Luc/Rluc標(biāo)記的報(bào)告基因和目的基因進(jìn)行共轉(zhuǎn)染，設(shè)置不同的檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)，一般為24h/48h；
4、外界干預(yù): 轉(zhuǎn)染后，可進(jìn)行物理/化學(xué)/病毒等的相應(yīng)刺激；
5、細(xì)胞處理: 采用進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)雙熒光素酶檢測(cè)試劑盒依照protocol操作；
6、熒光檢測(cè): 使用GENios Pro 酶標(biāo)儀或具有類似檢測(cè)功能的設(shè)備進(jìn)行熒光強(qiáng)度檢測(cè)。
客戶提供
基因模板，若無(wú)，我公司負(fù)責(zé)合成
研究的轉(zhuǎn)錄因子信息
預(yù)測(cè)的啟動(dòng)子或miRNA序列信息及結(jié)合位點(diǎn)
美軒提供
1、測(cè)序結(jié)果
2、雙熒光素酶檢測(cè)結(jié)果